Utile per
Facilitare la diagnosi della cheratite amebica in concomitanza con i risultati clinici
Informazioni cliniche
Gli acanthamoeba sono amebe onnipresenti, a vita libera con cellule molto piccole che causano infezioni rare, ma gravi, dell’occhio, della pelle, dei polmoni e del sistema nervoso centrale (SNC). Si trovano in tutto il mondo in acqua e nel suolo e possono entrare nel corpo per via inalatoria, attraverso la contaminazione delle ferite e l’uso delle lenti a contatto. Sono state descritte ben 24 specie che comprendono 18 genotipi (T1-T18), anche se la maggior parte delle infezioni umane sono dovute al genotipo T4. Data la loro diffusa distribuzione nell’ambiente, molte persone sono esposte ad Acanthamoeba durante la loro vita, ma pochissime si ammalano a causa di questa esposizione.
La forma più comune di infezione da Acanthamoeba è la cheratite amebica (AK). L’infezione si verifica principalmente nei portatori di lenti a contatto a causa della contaminazione delle lenti, delle soluzioni detergenti o dei contenitori. L’ameba E può anche entrare nella cornea a seguito di un trauma. L’AK è un’infezione corneale subacuta e dolorosa, associata a cicatrici estese e cecità se non trattata. I casi rispondono generalmente al trattamento, ma la ricaduta è comune. Rispetto all’infezione corneale, il coinvolgimento del SNC è raro e si osserva soprattutto in individui gravemente immunocompromessi, come i riceventi di trapianti d’organo e i pazienti affetti da AIDS. L’infezione del SNC può anche essere causata da un’ameba correlata, la Balamuthia mandrillaris.
L’ameba è solitamente sospettata clinicamente sulla base dei sintomi e dell’ esame oftalmologico confocale. La conferma dell’infezione è classicamente identificata mediante l’esame microscopico e la coltura di tessuto corneale e lenti a contatto o attrezzature che utilizzano la piastra di agar di acqua di rubinetto si sovrappongono ai batteri come fonte di cibo per le amebe. Purtroppo, deve essere tenuta ed esaminata per 7 giorni per la massima sensibilità. L’esame PCR fornisce un risultato più rapido con una sensibilità simile alla coltura ed è, quindi, il metodo preferito per confermare la diagnosi clinica di AK.
Valori di riferimento
Negativo
Interpretazione
Un risultato positivo indica la presenza del DNA della specie di Acanthamoeba ed è coerente con un’infezione attiva o recente. Mentre i risultati positivi sono indicatori altamente specifici della malattia, dovrebbero essere correlati con i sintomi, i risultati clinici e l’esame oftalmologico confocale.
Avvertenze
Mentre questo test è predestinato per rilevare l’infezione sintomatica con le specie di Acanthamoeba, la distribuzione diffusa di queste amebe di cellule microscopiche a vita libera nell’ambiente può contaminare oggetti inanimati come lenti a contatto e custodie. Pertanto, dovrebbe essere utilizzato per i pazienti con un’anamnesi clinica e sintomi oculari coerenti con la cheratite amebica.
Un prelievo inadeguato dei campioni o una conservazione impropria può invalidare i risultati del test.
Il DNA della specie di Acanthamoeba può essere rilevabile per un periodo di tempo sconosciuto dopo un trattamento adeguato.
Dati di supporto
I seguenti dati di verifica dell’esame supportano l’utilità di questo esame per i test clinici.
Inclusività della specie:
L’esame PCR per la Acanthamoeba rileva i 20 diversi ceppi di Acanthamoeba, inclusi i genotipi che causano malattie umane.
Precisione/Sensibilità diagnostica e specificità — Campioni freschi:
I risultati di questo test PCR che rileva il gene 18S rRNA della specie di Acanthamoeba sono stati confrontati con i risultati della coltura su 112 campioni di lenti a contatto/oculari. Dei 12 campioni positivi in coltura, 11 sono stati rilevati mediante PCR (sensibilità 92%). L’esame PCR ha inoltre rilevato altri 2 campioni positivi, entrambi dello stesso paziente con diagnosi clinica di cheratite amebica (AK), mentre 98 campioni sono risultati negativi sia per coltura che per PCR (specificità 98%).
Precisione / Sensibilità diagnostica e specificità — Campioni fissati con paraffina-formalina (FFPE):
Ventiquattro blocchi di tessuto FFPE archiviati sono stati testati con il saggio PCR della specie Acanthamoeba e i risultati sono stati confrontati con la diagnosi istopatologica (microscopica leggera). Quattordici dei tessuti avevano una diagnosi morfologica di cheratite amebica; di questi, 12 erano positivi alla PCR (sensibilità 86%). Dieci campioni erano negativi sia per istopatologia che per PCR (specificità 100%).
Dati di precisione supplementari:
Studi di spiking sono stati effettuati utilizzando materiale oculare in mezzi di trasporto (liquido per lenti a contatto, MEM), tessuto fresco, e tessuto FFPE spiked con DNA genomico di Acanthamoeba ad una concentrazione approssimativa di 50 target / mcL. Tutti i campioni sono stati poi estratti e testati in cieco. A 50 target / mcL, il 100% del materiale oculare, il fresco, e il tessuto FFPE erano positivi alla PCR.
Sensibilità analitica/Limite di rilevabilità (LoD):
-Il LoD determinato con diluizione seriale di cisti di Acanthamoeba coltivate (contate con un emocitometro) è stato considerato come 1 cisti per campione trattato.
-Il LoD stabilito usando DNA genomico inserito in una soluzione di lenti a contatto/mezzi di trasporto MEM è di 1,26 copie target/mcL.
-Il LoD stabilito utilizzando DNA genomico inserito in una matrice di tessuto fresco è di 6,5 copie target/mcL.
-Il LoD stabilito utilizzando DNA genomico inserito in una matrice di tessuto FFPE è di 5,7 copie di destinazione / ml.
Specificità analitica:
Nessun segnale dall’esame PCR è stato ottenuto dagli estratti di 47 isolati batterici, virali, parassitari e fungini provenienti da organismi simili o da organismi comunemente presenti nei campioni analizzati.
Precisione:
La precisione qualitativa inter- e intra-dosaggio è stata del 100%. Tutti i valori dei punti di incrocio erano entro 2 cicli della media.
Intervallo di riferimento:
L’intervallo di riferimento è “Negativo” per questo test. L’esame PCR e la coltura effettuate su 291 lenti a contatto di individui asintomatici non sono riuscite a rilevare il DNA o la crescita di Acanthamoeba.
Tuttavia, l’esame PCR può rilevare la colonizzazione della specie di Acanthamoeba a causa della distribuzione diffusa di questa ameba a vita libera nell’ambiente, e il test PCR dovrebbe essere utilizzato solo per i pazienti con un’anamnesi clinica e sintomi oculari coerenti con l’AK.
Intervallo riferibile:
Questo è un test qualitativo, e i risultati sono riportati come negativi o positivi per la specie di Acanthamoeba mirate.
